rna含量的计算方法有哪些方法

1.酵母rna含量测定的方法有几种

酵母rna含量测定的方法有几种

(1) 取洁净的血球计数板一块,在计数室上盖上一块盖玻片。

(2) 将酵母菌液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多),使菌液沿两玻片间自行渗入计数室,勿使产生气泡,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。也可以将菌液直接滴加在计数室上,然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。

(3) 静置约5分钟,先在低倍镜下找到计数室后,再转换高倍镜观察计数。

(4) 计数时用16中格的计数板,要按对角线方位,取左上、左下、右上、右下的4个中格(即100小格)的酵母菌数。如果是25中格计数板。除数上述四格外,还需数中央1中格的酵母菌数(即80小格)。由于菌体在计数室中处于不同的空间位置,要在不同的焦距下才能看到,因而观察时必须不断调节微调螺旋,方能数到全部菌体,防止遗漏。如菌体位于中格的双线上,计数时则数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差。

(5) 凡酵母菌的芽体达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算。每个样品重复分数2-3次(每次数值不应招差过大,否则应重新操作),取其平均值,按下述公式计算出每毫升菌液所含酵母菌细胞数。 每毫升菌液含菌数=每小格酵母细胞数*4000*1000*稀释倍数 。

(6) 血球计数板用后,在水龙头上用水柱冲洗干净,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或吹风机吹干。

2.如何测量RNA的纯度和含量

1. 相关概念

RNA质检参数OD260/OD280、OD260/OD230的意义。

260、280、320、230nm下的吸光度分别代表了核酸、蛋白质、盐浓度和有机溶剂的值。

A230: 测定其它碳源物质,如酚,糖类等。

A260:核酸的吸收峰测,测RNA,DNA,引物等的浓度用的。

A280:蛋白质的吸收峰。

一般的,我们只看OD260/OD280(Ratio,R)在1.8~2.1范围内时,我们认为 RNA中蛋白的污染是可以容忍的,不过要注意,当用 Tris 作为缓冲液检测吸光度时,R 值可能会大于 2(一般应该是<2.2的)。当R < 1.8时,溶液中蛋白的污染比较明显,可以根据自己的需要决定这份RNA 的命运。当R > 2.2时,说明RNA已经水解成单核酸了。纯RNA的OD260/OD280的比值为2.0。

2. RNA质量检验

RNA样品的品质检测一般分为总量,纯度与完整性三大项。

总量:微量分光光度计测260nm吸收值计算。

纯度:微量分光光度计测260nm/230nm吸收值的比值,用于评估有机溶剂残留;260nm/280nm吸收值的比值,用于评估蛋白质污染比例。

完整性:以Agilent Bioanalyzer进行毛细管电泳(capillary electrophoresis),并以软件的RIN(RNA Integrity Number)分数评估,10为RNA完整性最好,0为最差。

l RNA纯度

RNA在纯化过程中容易受到DNA、蛋白质及有机溶剂的影响,这些残存物将会影响以后的操作。光谱分析(NANODROP)利用物质对不同波长光的吸收度的不同,可以鉴别出溶液纯度及浓度。RNA溶液的A260/A280的比值是一种RNA纯度检测方法,比值范围一般为1.8-2.1。各项实验对RNA纯度要求不一,比如即使比值超出这个范围,RNA样品也一样可以用于一些普通实验中,如Northern杂交、RT-PCR、荧光定量PCR和RNA酶保护等实验。

3.如何测量RNA浓度

1、超微量分光光度计测260nm吸收值计算。

可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。

2、也可以用RNA胶(凝胶成像)检测。例如:原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。在胶上就有三条明显大小不一的条带。凝胶迁移分析。可以用来研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是:结合了蛋白的RNA在凝胶中的迁移速率更慢,因而可以区分出结合蛋白与未结合蛋白的RNA条带。

扩展资料

1、RNA的功能是:

(1)具有肽酰转移酶的活性。

(2)为tRNA提供结合位点。

(3)在蛋白质合成起始时,参与同mRNA选择性的结合,在肽链的延伸中与mRNA结合。

2、原核生物的rRNA分三类:5SrRNA、16SrRNA和23SrRNA。

真核生物的rRNA分四类:5SrRNA、5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA。

S为大分子物质在超速离心沉降中的一个物理学单位,可间接反映分子量的大小。原核生物和真核生物的核糖体均由大、小两种亚基组成。

3、凝胶成像对DNA或RNA胶 进行切胶、拍照、观察、分析的实验室类仪器,凝胶成像系统可以应用于分子量计算、密度扫描、密度定量、PCR定量等生物工程常规研究。

参考资料来源:百度百科—核糖体RNA

参考资料来源:百度百科—超微量分光光度计

参考资料来源:百度百科—凝胶成像

参考资料来源:百度百科—RNA GEL SHIFT

rna含量的计算方法有哪些方法

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