用于细胞计数的方法有哪些

1.高中常用的细胞计数法有哪几种

细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。

一般利用计数板(血球计数板)进行。即可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。

不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。 1、制备细胞悬液 对于悬液培养的细胞,可直接进行下面的步骤2(计数与计算过程)。

如果计数对象为贴壁生长的细胞,首先需将培养物制备成细胞悬液。 (1) 终止培养,将培养液吸出,用PBS洗培养物一次。

(2) 给培养瓶内加入1ml 0.25%胰蛋白酶溶液,于37℃消化3~5min 。期间不断在镜下观察。

当细胞变圆接近脱壁时,弃消化液。 (3) 加入一定量的培养液(如果这些培养细胞不再有用,可加PBS),用吸管吹打,使细胞脱壁而制成细胞悬液。

2、计数与计算过程 ( 1) 在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。 (2) 用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹糟处流出悬液,至盖玻片被液体充满为止。

(3) 置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细胞团按单个细胞计数。

(4) 按下式计数细胞悬液的密度:细胞密度=(4个大格细胞总数/4)*104个/ml 注意事项: (1) 务必使分散成单个细胞,取样计数前,充分混匀细胞悬液。 (2) 显微镜下计数时,遇到2个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。

如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分; 或细胞数500个/10 mm2 时,说明稀释不当,需重新制备细胞悬液。

2.微生物计数方法有哪些

测定微生物计数的方法有很多,主要有以下几种:

1.血细胞计数法

将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数.

①此法的缺点是不能区分死菌和活菌.

②对压在小方格界线上的细菌,应当取平均值计数.

③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化

2.稀释涂布平板法

原理:每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落.培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌.

①这一方法常用来统计样品中活菌的数目

②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当两个活多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落.因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示.

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定.但不适于测定样品中丝状体微生物,例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等.

④此法若不培养成菌落,可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上,经固定染色后在显微镜下计数,这样又称涂片计数法.染色可用台盼蓝,台盼蓝能使死细胞染成蓝色,可分别计数死细胞和活细胞.

3.滤膜法

滤膜法是当样品中菌数很低时,可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器.然后将滤膜干燥、染色,并经处理使膜透明,再在显微镜下计算膜上(或一定面积上)的细菌数.

此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数.例如测定饮用水中大肠杆菌的数目:将已知体积的水过滤后,将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养.在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色,可根据培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数目.

此法也是统计样品中活菌的数目.

4.比浊法

原理是在一定范围内,菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可借助与分光光度计,在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度表示菌量.实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内,否则不准确.

5.显微镜直接计数法

在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法.”这里说的显微镜直接计数,我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数.再如滤膜法也一样,可以有两种情况.

另外,微生物计数法发展迅速,多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目.

3.【如何对活细胞进行计数

去哪里找最出色的生命科学学术交流论坛?>>> 用台盼蓝拒染法计数活细胞:1. 彻底混合细胞悬液,取100礚样本至一支试管中.2. 台盼蓝染色有两种方法.一是首先用细胞培养液稀释细胞样本,然后用台盼蓝溶液(产品号 #07050) 1/2稀释样本(细胞和台盼蓝的稀释比为1:1).或者直接用台盼蓝溶液稀释样本.例如:1/40稀释样本加入50礚 细胞悬液至950礚 IMDM+2% FBS (1/20 稀释),混合,然后取100礚稀释的细胞悬液加入100礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40).或取20礚细胞悬液加入780礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40).3. 涡悬振荡,混合稀释的细胞样本.4. 血细胞计数器的准备:首先用酒精清洁其小室和盖玻片,然后用脱脂绵擦干.5. 仔细的将盖玻片覆盖两个小室.6. 用微量移液器或毛细管吸取稀释的样本.7. 用微量移液器或毛细管将样本充满两个小室.不要过满或不足.8. 计数4个大方格中细胞核的总数(1x1x0.1mm)或>100个细胞.分别死细胞和活细胞.死细胞染成蓝色的死细胞(因为细胞完整性破坏,细胞吸收台盼蓝),活细胞透明有折光(未染色).9. 活细胞计数按以下方法计算:每个方格中活细胞总数平均值x稀释倍数x104= 活细胞数/mL10.活细胞百分比计算方法如下:。

4.计数方法有哪些

1、科学计数法

数学术语,a*10的n次幂的形式.将一个数字表示成(a*10的n次幂的形式),其中1≤|a|例如:

890314000保留三位有效数字为8.90*10的8次方,8.90*10^8;

839960000保留三位有效数字为8.40*10的8次方,8.40*10^8.

2、中国计数法

中国人在计数时,常常用笔画“正”字,一个“正”字有五画,代表5,两个“正”字就是10,以此类推.这个计数方法简便易懂,很受中国人欢迎.现在很多中国人在统计选票、清点财物等时候,都还保持着用“正”字计数的习惯.

5.检测体细胞数有哪些方法

目前获得世界各国普遍承认和使用的体细胞计数方法概括起来主要分为显微镜人工计数法和自动计数仪计数法。

1、显微人工计数:体细胞计数的国际标准方法为显微镜镜检法,此法准确,大部分的快速检测方法均用此法作校准,但在制备样品、计数镜检时费时、费力,不适合作为现场快速和大样品量时使用。

2、自动计数仪计数:目前,在乳品生产中牛乳体细胞计数主要是依靠大型的体细胞仪完成的,体细胞自动计数分析研究主要有以下两个方面:

(1)流式细胞分析法.具代表性的产品为美国Bently计数仪,福斯Fossomatic 5000,荷兰Delta体细胞计数仪等。该法检测速度快,适合乳品集中检测,但仪器成本高,不能够保留样本,且需要熟练人工操作,经常性校正监测等。

(2)另一方面是利用数字图像分析系统,典型产品如韩国C-reader ADAM体细胞计数仪,该法数据准确,排除人为因素影响。由于该方法是基于标准镜检法的一种方法,所以其在韩国已经使用该种方法代替标准法对大型自动仪器进行校正。华诚睿光的牛博士Ⅱ和牛博士Ⅲ就是这种检测方法的典型代表。

用于细胞计数的方法有哪些

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